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ELISA试剂盒的测验要求
点击次数:100 发布时间:2019-04-28

正式实验时,应别离以阳性对照与阴性对照控制实验条件,待检样品应作一式二份,以确保实验成果的准确性。有时本底较高,阐明有非特异性反响,可选用羊血清、兔血清或BSA等封闭。
实验条件的挑选
在ELISA中,进行各项实验条件的挑选是很重要的,其间包括:
(1) 固相载体的挑。盒矶辔镏士勺魑?滔嘣靥,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可所以凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不论何种载体,在使用前均可进行筛。河玫攘靠乖??,在同一实验条件下进行反响,调查其显色反响是否均一性,据此判明其吸附功能是否杰出。
(2) 包被抗体(或抗原)的挑。航?固?或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相同时,调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。
(3) 酶符号抗体作业浓度的挑。菏紫扔弥苯覧LISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法"(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体别离为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其作业浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的挑。憾怨┣馓宓奶粞∫?笫羌哿、安全、有明显地显色反响,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌效果,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是现在较为满足的供氢体。底物效果一段时刻后,应加入强酸或强碱以终止反响。一般底物效果时刻,以10-30分钟为宜。底物使用液有必要新鲜制造,尤其是H2O2在临用前加入。

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