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大鼠ELISA试剂盒的底物
点击次数:89 发布时间:2019-03-14

大鼠ELISA试剂盒的底物
HRP催化过氧化物的氧化反应,zui具代表性的过氧化物为H2O2,其反应式如下:
DH2+ H2O2 D+ H2O
上式中,DH2为供氧体,H2O2为受氢体。在ELISA中,DH2一般为无色化合物,经酶作用后成为有色的产物,以便作比色测定。常用的供氢体有邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基联苯胺(3,3,5,5-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2-azino-di-(3-ethylbenziazobine sulfonate-6)]。
OPD氧化后的产物呈橙红色,用酸终止酶反应后,在492nm处有zui高吸收峰,灵敏度高,比色方便,是HRP结合物zui常用的底物。OPD本身难溶于水,OPD·2HCL为水溶性。曾有报导OPD有致异变性,操作时应予留意。OPD见光易变质,与过氧化氢混合成底物运用液后更不安稳,须现装备现用。在试剂盒中,OPD和H2O2一般分成二组分,OPD可制成一定量的粉剂或片剂形式,片剂中含有发泡助溶剂,运用更为方便。过氧化氢则配入底物缓冲液中,有制成易保存的浓缩液,运用时用蒸馏水稀释。先进的ELISA试剂盒中则直接配成含保护剂的工作浓度为0.02% H2O2的运用液,只需参加OPD后即可作为底物运用液。

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