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晨时解读:ELISA技术培训之检测样品的处理技巧
点击次数:130 发布时间:2018-11-13

 ELISA试验的作用可不能彻底依靠试剂盒产品,在我公司确保产品质量的一起,您还需求留意保存、样本、操作等等。今日研域(上海)化学带您来看ELISA技术培训之检测样品的处理技巧!供参阅。
一、细胞裂解液
① 吸去培育板内的培育基,用胰酶消化细胞,加适量培育基将细胞从培育板上吹下来。悬浮细胞可省掉。
② 搜集细胞悬液,1000×g离心10min,弃去培育基,用预冷的PBS润洗3次。
③ 参加适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前参加蛋白酶抑制剂)重悬细胞。一般6孔板一个孔的细胞量需求150~250μL PBS重悬。
④ 将样品放入-20℃或-80℃,使样品冷冻,再放室温冻结样品,重复冻融几回,使细胞充沛裂解。也可将样品进行超声破碎,以到达裂解的意图。
⑤ 4℃10000×g 离心10min,除掉细胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。
二、血清
这是*常用于ELISA检测的一类样本,处理也比较简单。
用无热原、无内毒素的试管或离心管搜集血液标本,将试管或离心管室温放置2小时或4℃过夜,使血清分出。(将试管或离心管倾斜放置,使液面横截面增大,能使血清更大程度的分出)4℃1000×g离心20分钟,仔细搜集上清。建议将血清分装多份,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。
采血过程中应防止溶血,由于红细胞裂解时会开释具有过氧化酶活性的物质,在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色,而导致检测的不准确性。一起也应防止细菌污染,由于菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
三、血浆
用含抗凝剂的采血管或离心管搜集血液标本,标本搜集后30min内4℃1000×g离心15min,取上清即血浆。将上清分装多份,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。防止运用溶血或高血脂的标本。
常用的抗凝剂为EDTA、肝素钠和枸橼酸钠等,检测时还应仔细阅读试剂盒说明书,查看试剂盒是否对抗凝剂有特殊要求。
四、细胞培育上清
取细胞培育上清到离心管,1000×g离心20min,除掉细胞碎片及杂质,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。
五、安排匀浆液
① 将安排样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲刷,洗去安排外表残留的血液或杂质。
② 将安排块称重,记载后剪碎,碎块应尽量。?阌谠冉?酶?渑妩br />③ 将安排按必定的份额参加预冷的PBS(临用前参加蛋白酶抑制剂)匀浆,匀浆时置于冰上或冰浴中。(一般按安排分量:PBS体积=1:9的份额匀浆,例如1g的安排样本对应9mL的PBS,详细体积可根据试验需求恰当调整,检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数)
④ 汲取匀浆液到离心管,4℃5000×g离心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重复冻融。
六、尿液、唾液等其他液体生物样本
1000×g离心20min,取上清即可检测。
总的来说,由于ELISA只能检测可溶性蛋白的含量,所以应确保一切样本均为弄清的液体,沉积或悬浮物都应离心去除。
为了确保检测的准确性,保存于-20℃或-80℃的样本在1~6个月内检测;4℃保存的样本应在1周内进行检测。

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