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你需要攻克这些问题,轻松搞定ELISA实验
点击次数:159 发布时间:2018-10-12

试剂盒是蛋白定量的金规范,也是免疫学研讨中最常用的试验办法之一。很多人觉得ELISA很简单,其实不然。研域(上海)带你绕开ELISA试验中出现的各种问题,轻松搞定ELISA试验~
试验原理
1.包被:抗原/抗体,固相化
2.反响: 1)待测抗体/抗原; 2)酶标抗原/抗体
3.洗涤:使结合在固相上的抗原抗体复合物与未结合的别离
4.底物显色:定性/定量剖析
常用办法
1.间接法
检测抗体最常用的办法, 首要用于对病原体抗体的检测。
优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不同的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保留它最多的免疫反响性。
缺陷:交互反响发生的机率较高
2.双抗体夹心法
检测大分子抗原最常用的办法。
优势:高活络、高专一性,抗原无须事前纯化。
缺陷:抗原必定得具有两个以上的抗体结合部位。
3.竞争法
检测小分子半抗原(药物、激素等)。
优势:可适用比较不纯的样本,并且数据再现性很高。
缺陷:全体的敏感性和专一性都较差。

不同试剂盒中的组分能否通用
除非是共用的试剂如洗液、检测缓冲液,其它组分不主张用其它试剂盒的组分,乃至是同一目标不同批次的试剂盒里的组分。这些组分(包含规范品、规范品稀释液、检测抗体、酶等)都是通过优化的,假如轻率运用其它试剂盒的组分,有可能对成果产生影响。
样本经不同梯度稀释,核算得到的样本值差异较大
有时候咱们不清楚样本中意图蛋白的浓度怎么,应该怎么稀释,那么咱们就会做下预试验,断定稀释倍数。但是有时候同一样本做了几个不同梯度稀释后,核算得到的样本值之间差异较大,应该挑选哪一个稀释倍数呢?
这儿触及到了基质效应。一般血清样本加样量较高时,血清中的各种蛋白会抑制抗原抗体的接触,基质效应较显着。而通过稀释后,搅扰要素也随之稀释,影响就会较小。当某两个梯度稀释后,核算得到的样本值挨近时,咱们就能够以为在该稀释梯度时,样本中的搅扰要素影响较小,核算得到的值也是挨近真实的。但是这样的稀释是针对意图蛋白浓度较高的样本而言。关于浓度很低的样本,通过多倍稀释后,就愈加测不到了,此时可按照厂家说明书引荐的加样方法操作。

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